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唯尚立德?lián)碛谐墒旄咝У腡ALEN及CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)平臺、完善的模式生物構(gòu)建平臺,完美整合從載體設(shè)計、構(gòu)建、活性鑒定、基因突變動物模型建立等各個環(huán)節(jié)?,F(xiàn)推出小鼠、大鼠等模式生物基因敲除技術(shù)服務(wù),為客戶提供周期短、性價比高的模式生物構(gòu)建服務(wù)。至今未曾失敗過,我們鄭重承諾失敗將全額退款。
TALEN靶向敲除基因原理簡介
TALE技術(shù)(Transcription activator-like effectors)是一種嶄新的分子生物學(xué)工具??茖W(xué)家發(fā)現(xiàn),來自植物細(xì)菌Xanthomonassp的TAL蛋白的核酸結(jié)合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定的對應(yīng)關(guān)系。利用TAL的序列模塊,可組裝成特異結(jié)合任意DNA序列的模塊化蛋白。TALEN(Transcription activator-like effector(TAL) nucleases)技術(shù)是基于TALE與人工改造的核酸內(nèi)切酶的切割域(FokI)構(gòu)建針對任意特定核酸靶序列的重組核酸酶。通過TAL的DNA識別域結(jié)合到靶位點上,及FokI切割域形成二聚體后,可特異性對目標(biāo)DNA序列實現(xiàn)切斷。在隨后的非同源末端連接修復(fù)過程中,斷開的DNA雙鏈會由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實現(xiàn)目標(biāo)基因功能的缺失。
CRISPR/Cas9靶向敲除基因原理簡介
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對特定基因序列進行DNA修飾的技術(shù)。CRISPR/CRISPR-associated(Cas)是細(xì)菌和古細(xì)菌一種不斷進化適應(yīng)的免疫防御機制。在這系統(tǒng)中,CRISPR對特定DNA的識別是由crRNA或向?qū)NA通過堿基互補配對,定向?qū)ふ夷繕?biāo)DNA序列。靶定目標(biāo)序列后,Cas9蛋白負(fù)責(zé)對目標(biāo)DNA進行剪切,造成靶DNA雙鏈斷裂。在隨后的非同源末端連接修復(fù)過程中,斷開的DNA雙鏈會由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實現(xiàn)目標(biāo)基因功能的缺失。
TALEN/CRISPR構(gòu)建基因敲除小(大)鼠技術(shù)流程圖
服務(wù)流程及周期
步驟 | 內(nèi)容 | 周期 |
打靶質(zhì)粒構(gòu)建 | 設(shè)計不同靶點,SNP檢測,組裝TALEN質(zhì)粒2-3對,或3條gRNA,檢測TALEN的SSA活性或gRNA活性 | 1個月 |
得到Founder | 選擇活性較高的打靶質(zhì)粒,體外轉(zhuǎn)錄成mRNA,顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。數(shù)量:至少2只 | 2-3個月 |
得到F1代雜合子 | 2個月后性成熟,F(xiàn)ounder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周齡基因型鑒定,獲得穩(wěn)定傳代的基因突變雜合子F1代。數(shù)量:2個lines、至少2只/line(性別隨機,若甲方要求一雌一雄,如果第一批F1代小鼠都是同性別,則進行第二次交配,每次交配到生出需3個月,依此類推,直至一雌一雄。) | 3-4個月 |
我們的優(yōu)勢
1、我們已經(jīng)具有4000多對TALEN質(zhì)粒、CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建和活性驗證的成功經(jīng)驗,大量的技術(shù)經(jīng)驗使我們能準(zhǔn)確、快速地構(gòu)建出具有體內(nèi)活性的TALEN和CRISPR/Cas9質(zhì)粒。
2、我們具有強大的售前和售后技術(shù)支持團隊,可以為客戶提供免費專業(yè)的技術(shù)支持和方案設(shè)計及拓展。
3、我們已經(jīng)成功使用TALEN及CRISPR/Cas9系統(tǒng)為客戶提供了上百例成功案例,囊括家蠶、斑馬魚、小鼠、大鼠等突變體,至今未曾失敗過,我們的服務(wù)受到了客戶的一致認(rèn)可。
4、價格低、周期短。我們高效專業(yè)的技術(shù)平臺使得我們能在最短的時間內(nèi)完成模式生物的構(gòu)建服務(wù)。較短的時間使得我們能夠大大的節(jié)約成本,為客戶提供價格最低的服務(wù)
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